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PCR克隆技术概述

PCR克隆(polymerase chain reaction) 技术是指聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。

DNA扩增的传统方法:

DNA扩增的传统方法为分子克隆法,需将构建含有目的基因的载体导入细胞进行扩增,并需要用探针进行筛选,包含DNA酶切、连接、转化、培养及探针杂交等技术,虽然技术上已无难点,但操作复杂,周期长,且不利于普及。

PCR克隆技术优势:

PCR克隆技术由1983年美国Mullis首先提出设想,且在1985年发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR克隆技术的真正诞生。到如今2013年,PCR克隆已发展到第三代技术。PCR克隆技术可以将微量目的DNA片段扩增至数百万倍以上。PCR克隆技术凭借其敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优势,广泛应用于微生物学、医学、农业及考古学等领域,并已普及各类实验室,大大简化了传统的分子克隆技术,从而使研究人员更容易地对目的基因进行分析、鉴定。

PCR克隆技术基本原理:

PCR克隆是利用DNA在体外氏95℃高温时变性会变成单链,低温(经常是60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72℃左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5′-3′)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。

PCR克隆技术作为一种基本的分子生物学方法,被广泛的应用于基因克隆、基因重组、DNA序列分析及基因定量检测等分子生物学应用中。同时PCR克隆技术也应用于医学的肿瘤相关的基因检测、遗传病早期诊断等方向中,为医学鉴定及风险分析提供了有效的技术手段。

泓迅科技Syno®2.0平台的专利克隆技术可以在不依赖载体酶切位点的基础上,帮助客户将目的基因克隆到所需载体的任意指定位点,满足客户的各种克隆设想方案,并相对于普通克隆大大节省了时间。对于不同基因片段的同载体克隆,我们也可以高效完成高通量亚克隆服务。

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