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PCR克隆的应用及其发展

聚合酶链式(PCR)反应技术具有特异性强、灵敏度高、快速、简便等很多优点,能在短时间内将所要的目的基因扩增至数万倍。在生命科学飞速发展的今天,PCR克隆技术已经成为分子生物学中的常规技术。PCR克隆技术已经广泛应用于生物学研究,医学,病毒检测,食品工业等方面。

PCR技术应用于基因克隆

运用PCR技术进行基因克隆和亚克隆在细胞生物学研究中起到了巨大的作用。PCR克隆技术可以对单拷贝的基因放大几百万倍,产生的特异DNA片段可以是微克(pg)级的,省略了从基因组DNA中克隆某一特定基因片段所需的DNA酶切。连接到载体DNA、转化、建立DNA文库、基因筛选和坚定以及亚克隆等繁琐的实验过程。

PCR克隆技术应用于DNA重组

分子生物学江苏快3刘军在线计划研究中,可以通过PCR克隆技术在体外将不同来源的的特异基因或DNA片段插入病毒、质粒或其他载体,构建重组DNA分子,再导入到受体细胞中进行扩增和繁殖,经过筛选,把含有目的基因的转化子细胞再扩增提取获得大量DNA。而重组DNA技术可应用于人类基因组计划、有价值的蛋白表达、基因诊断和治疗、转基因动植物、等领域的研究。

PCR克隆技术应用于基因定量检测

江苏快3刘军在线计划应用PCR克隆技术可以定量监测标本中靶基因的拷贝数,将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于同一个试管中进行PCR克隆。电泳分离后观察条带强度,或在引物5’端标记放射性核素,通过检测两条带放射性强度来检测基因拷贝数。利用PCR克隆技术还可以完成mRNA的定量检测,首先提前总RNA,加入与mRNA 3、7区互补的引物,在逆转录酶的作用下合成cDNA,然后参考DNA定量检测的步骤。

应用PCR克隆技术可以对tuRNA作比较准确的定量,甚至连Northern印记杂交未能发现的1TIRNA都能检测的到。

内源基因的改变和外源基因的入侵也是导致人类疾病的很大威胁,但是,不论致病原因是否由基因改变所致,只要病原体存在,就能找到其存在的核酸。由此,PCR克隆技术及其相关的技术发展至今,完全可应用于传染病病原体检测和诊断、肿瘤相关基因检测、遗传病早期诊断、骨髓移植HLA-D位点配型及进化学分析及法医学等领域的研究。

泓迅科技Syno®2.0平台的专利克隆技术可以在不依赖载体酶切位点的基础上,帮助客户将目的基因克隆到所需载体的任意指定位点,满足客户的各种克隆设想方案,并相对于普通克隆大大节省了时间。对于不同基因片段的同载体克隆,我们也可以高效完成高通量亚克隆服务。

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